Введение. Рапс (Brassica napus L.) является третьим по значимости источником растительного масла в мире после пальмового и соевого [1]. Создание двунулевых (безэруковых, с низким содержанием глюкозинолатов) сортов сделало рапс одним из основных источников растительного масла на мировом рынке с постоянной тенденцией к увеличению его доли в производстве масличных культур [2; 3].
Повышение протеиновой питательности как объемистых, так и концентрированных кормов в лесной зоне возможно за счет расширения площадей посева капустных масличных культур, прежде всего рапса. Использование в производстве сортов рапса с сокращенным вегетационным периодом позволяет продвинуть культуру рапса на север, получать семена без предварительной десикации, сократить затраты на сушку. Селекция на скороспелость играет важную роль в современных условиях интенсификации производства и экономии энергоресурсов [4; 5]. Скороспелость также важна в связи с тем, что в условиях умеренных широт уборка ранних сортов, как правило, приходится на сухой период. Качество масла у скороспелых сортов выше, поскольку недозрелые семена содержат много хлорофилла и свободных жирных кислот, что снижает качества масличного сырья. Для производства требуются также неполегающие низкорослые компактные сорта с устойчивыми к растрескиванию стручками. Вследствие полегания растений и растрескивания стручков теряется до 25–50% урожая [6]. Еще одной задачей селекции рапса является улучшение жирнокислотного состава: повышение количества олеиновой и снижение линолевой и линоленовой кислот, быстро окисляющихся на воздухе. Для повышения питательной ценности рапсовых семян и концентрированных кормов с их участием актуально уменьшение содержания клетчатки, снижающей переваримость и усвояемость кормов, особенно у моногастричных животных.
Помимо урожайности семян, содержание масла в семенах является одним из самых требовательных критериев при разработке сортов рапса. Engqvist G.M. and Becker H.C. (1993) предложили одновременно улучшать урожайность семян и содержание масла и белка [7]. О важности одновременного повышения урожайности семян и содержания масла в рапсе писали Aytac и Kinaci (2009) [8].
Анализ литературы показывает, что в мире создано более 2700 мутантных сортов различных культур с улучшенными агрономическими признаками [9; 10]. Метод мутагенеза также был успешно использован селекционерами растений на рапсе и горчице [11; 12]. С помощью мутагенеза Shah A.S. and Rehman K. (2009) удалось повысить содержание масла в мутанте рапса (43–47%) по сравнению с родительским сортом (41–43%) [13].
В селекционных программах часто используют химический мутагенез, который увеличивает генетическую изменчивость и открывает новые возможности для улучшения морфологических признаков, состава жирных кислот и повышения масличности семян [14]. Среди химических мутагенов алкилирующий агент этилметансульфонат (ЭМС) является наиболее часто используемым мутагеном для растений, поскольку он вызывает высокую частоту нуклеотидных замен, т. е. точечных мутаций. ЭМС применяют, как правило, в высоких концентрациях [15]. Так, для изменения жирнокислотного состава (ЖКС) рапсового масла исследователи использовали растворы ЭМС в концентрациях 0.4, 0.6 и 0.8% [16]; 0.3, 0.42 и 0.73% [17]; 1, 1.2, 1.4, 1.6% [18], 5% [19] или 2%, 5%, 8% [20]. По данным S. Channaoui et al. (2019), по сравнению с контрольными растениями, мутанты, полученные из семян, обработанных низкими дозами, а именно 1% ЭМС, раньше начинали цветение и созревание и имели более высокое количество стручков на растение. Кроме того, они были в целом более приспособлены, чем исходный сорт и другие мутанты, к стрессовым условиям, связанным с низким количеством осадков, высокой температурой и контрастными сроками посева. Это объясняет фенотипическую стабильность и адаптивность этих мутантов в изучаемых средах [18]. В то же время методика, принятая в Институте химической физики им. Н.Н. Семенова, предполагает использование мутагенов, в том числе ЭМС, в низких концентрациях: 0,02–0,1% [21; 22; 23].
Целью настоящей работы было изучение линий с измененным типом ветвления, устойчивостью к полеганию и растрескиванию стручков, различной продолжительностью вегетационного периода, семенной продуктивностью и биохимическими свойствами; отбор и оценка лучших линий в конкурсном испытании, передача перспективной линии в Госкомиссию по сортоиспытанию и охране селекционных достижений в качестве нового сорта.
Материалы и методы. Работа проводилась на сорте ярового рапса Викрос селекции ВНИИ кормов (патент № 3038). Для индуцирования мутаций были использованы три мутагена: этилметансульфонат (ЭМС), диэтилсульфат (ДЭС) и диметилсульфат (ДМС). Семена обрабатывали в Институте химической физики имени Н.Н. Семенова в течение 16 часов в водных растворах мутагенов в следующих концентрациях: ЭМС 0.3, 0.2, 0.04, 0.03, 0.02%; ДМС 0.08, 0.06, 0.02% и ДЭС 0.06, 0.05%. В контрольном варианте семена замачивали в воде.
В результате воздействия ЭМС в концентрации 0,03% на семена рапса была получена и впервые выделена на Кропотовской биостанции ИБР РАН форма поколения М2, давшая начало линиям, сочетающим в себе положительные признаки. В поколении М5 было отобрано 17 линий. Для дальнейшего изучения использовали шесть максимально выровненных по габитусу самоопыленных линий с улучшенным биохимическим и жирнокислотным составом семян.
Растения выращивали в условиях теплицы и поля. В первом опыте семена проращивали в кассетах с перлитом, и сеянцы в фазе двух настоящих листьев пикировали в горшочки с почвой. Затем 25–30 дневную рассаду высаживали в поле в две строчки по схеме 45 × 15 см по 30 растений в трехкратной повторности. Во втором опыте семена высевали селекционной сеялкой на делянки площадью 10 м2 с густотой стояния 70–80 растений в четырехкратной повторности. Самоопыление растений проводили с использованием изготовленных из ультрасила изоляторов.
Оценка проходила на Центральной экспериментальной базе ФНЦ «ВИК им. В.Р. Вильямса». Закладка питомников проводилась в соответствии с «Методическими рекомендациями по селекции и семеноводству масличных культур», наблюдения и учеты — по методике ВНИИ кормов и ВИР. Использовалась принятая для зоны агротехника: удобрения вносили в норме N60P20K30, защита растений от вредителей проводилась в фазу розетки (от крестоцветной блошки) и в фазу бутонизации (от цветоеда) путем обработки посевов препаратом Децис Эксперт, КЭ (100 г/л) с нормой внесения 0,125 л/га.
Содержание общего азота определяли фотометрически с последующим пересчетом на белок, содержание жира — методом обезжиренного остатка, содержание сырой клетчатки — по Ганнебергу и Штоману. Жирнокислотный состав масла определяли методом газожидкостной хроматографии на приборе Кристалл 2000 М с использованием капиллярной колонки ZB 50 длиной 30 м с компьютерной программой обработки данных. Для идентификации ЖК использовали стандарт Supelco 37 component Fame Mix 10 mg/ml in CH2Cl2 фирмы Supelco (USA). Содержание глюкозинолатов в семенах было определено палладиевым методом на спектрофотометре. Статистическая обработка результатов исследований проведена с использованием «Методики полевого опыта».
Результаты исследований. Исследованиями пакистанских ученых I Ali., H.M. Ahmed and S.A. Shah (2013) была показана эффективность отбора мутантных генотипов рапса с лучшим потенциалом урожайности в ранних поколениях [24]. В нашей работе форма, отобранная в М2 и отличающаяся рядом морфологических признаков, позволила получить к пятому поколению целую серию интересных перспективных линий [25].
Одними из значительных отличий между мутантными формами и растениями дикого типа являются время прохождения фаз развития и характер ветвления. Мутантные растения зацветали на пять–семь дней раньше, чем растения дикого типа. У 50% растений мутантных линий соцветия на главных побегах зацветали через 52–55 дней (от всходов) при выращивании из рассады, и через 44–46 дней при прямом посеве. В пазухах первой пары и второго–третьего настоящих листьев развивались мощные боковые побеги первого порядка (4–5 шт.), которые зацветали на всем растении одновременно через 62–64 дня (из рассады) и через 53–55 дней при прямом посеве. В то же время у растений дикого типа цветение боковых побегов начиналось только через 14–20 дней после зацветания главного соцветия. Для контрольных растений рапса было характерно акротонное ветвление, при котором образование побегов первого порядка происходит сверху вниз, то есть начинается в пазухах листьев, расположенных ближе к главному соцветию, а позднее формируются побеги из нижних узлов. Нижние побеги отрастают на высоте около 15–25 см от корневой шейки, причем нижние междоузлия на главном побеге — не менее 7–10 см. Последние 4–5 междоузлий до главного соцветия укороченные, около 3–5 см. Для мутантных форм с ускоренным типом развития было характерно базитонное ветвление (в направлении снизу вверх). Отрастание боковых побегов начиналось от основания главного стебля. Нижние междоузлия были укороченные, и первые 5–6 побегов первого порядка расположены на расстоянии 1–3 см от корневой шейки (рис. 1). Было отмечено, что изменение архитектуры растения способствует большей устойчивости растений рапса к полеганию. При дружном зацветании нескольких побегов почти одновременно с главным сокращались сроки созревания основной массы семян.
Основная масса стручков отобранных мутантных линий образуется на мощных, хорошо развитых нижних побегах, цветение и созревание семян происходит в равных погодных условиях, не растянуто по времени, что исключает матрикальную разнокачественность семян, причиной которой является асинхронность органообразовательных процессов [26]. Согласно результатам исследований мутантов озимого рапса по гену Wrinkled1 [27] с ускоренным развитием и цветением боковых побегов, его действие обусловливает повышенный синтез и накопление углеводов и их отток из листьев в семена, что способствует увеличению содержания жира в семенах и повышению содержания олеиновой кислоты. Семена наших лучших мутантных линий отличались повышенным содержанием жира, пониженным содержанием клетчатки и улучшенным ЖКС. Линия 834-16 была выделена по этим признакам (табл. 1).
Рис. 1. Цветущее растение ярового рапса Велес
1. Биохимический состав семян перспективной линии 834-16
|
Образец |
Содержание, % |
||||||||
|
жир |
белок |
клетчатка |
|||||||
|
2016 |
2017 |
2018 |
2016 |
2017 |
2018 |
2016 |
2017 |
2018 |
|
|
Викрос |
46,84 |
45,07 |
46,55 |
19,53 |
26,77 |
23,94 |
9,35 |
7,82 |
8,34 |
|
834-16 |
47,43 |
48,1 |
48,48 |
19,69 |
24,4 |
22,88 |
7,13 |
6,52 |
7,62 |
Линия 834-16 отличалась по сравнению со стандартом повышенным содержанием ценной олеиновой кислоты (С18:1) на 7,15% и пониженным на 4,7% линолевой (С18:2) и на 2,6% линоленовой (С18:3) кислот (табл. 2). Эруковая кислота (С22:1) отсутствовала.
Урожайность семян перспективного образца 834-16 в конкурсном сортоиспытании варьировала от 2,52 до 3,28 т/га и превысила сорт-стандарт Викрос в среднем за три года на 0,64 т/га.
2. Жирнокислотный состав перспективной линии 834-16
|
Линия |
Основные жирные кислоты, % |
||||||
|
С16:0 |
С18:1 |
С18:2 |
С18:3 |
С20:0 |
С20:1 |
С22:0 |
|
|
Викрос |
4,1 |
64,12 |
19,86 |
9,82 |
0,62 |
1,51 |
0,34 |
|
834-16 |
3,89 |
71,27 |
15,18 |
7,24 |
0,58 |
1,17 |
0,26 |
По содержанию жира образец 834-16 на 1,6% превышал стандарт, а по содержанию протеина на 1,2% уступал стандарту.
По сбору масла перспективный образец превышал стандарт на 0,35 т/га (на 29%), а по сбору протеина — на 0,11 т/га (на 18%) (табл. 3).
3. Урожайность семян, сбор жира и белка перспективного образца ярового рапса
в конкурсном сортоиспытании, ЦЭБ ФНЦ «ВИК им. В.Р. Вильямса»
|
Образец |
Урожайность семян, т/га |
Сбор жира, т/га |
Сбор белка, т/га |
|||||||||
|
2016 г. |
2017 г. |
2018 г. |
средняя |
2016 г. |
2017 г. |
2018 г. |
средний |
2016 г. |
2017 г. |
2018 г. |
средний |
|
|
Викрос |
2,75 |
2,70 |
2,46 |
2,64 |
1,29 |
1,22 |
1,14 |
1,22 |
0,54 |
0,72 |
0,59 |
0,62 |
|
834-16 |
3,71 |
3,62 |
2,52 |
3,28 |
1,76 |
1,74 |
1,22 |
1,57 |
0,73 |
0,88 |
0,58 |
0,73 |
|
НСР05 |
0,27 |
0,21 |
0,26 |
— |
0,15 |
0,14 |
0,10 |
— |
0,10 |
0,09 |
0,08 |
— |
Вегетационный период до созревания за годы испытаний составлял 101–106 дней, что на 3–5 дней раньше стандарта (рис. 2).
В 2018 г. образец был передан в Государственную комиссию по испытанию и охране селекционных достижений под названием Велес (рис. 3).
Преимуществом сорта, наряду с отсутствием эруковой кислоты в масле, является низкое содержание глюкозинолатов в семенах — 11,6–13,9 мкмоль/г, что позволит использовать семена, жмых и шрот при кормлении животных в повышенных дозах. Сорт отличается равномерным цветением и созреванием (рис. 4); устойчивость к полеганию — 4,5–5 баллов, устойчивость к поражению альтернариозом и пероноспорозом — средняя.
Рис. 2. Начало цветения рапса Велес
Рис. 3. Рапс яровой Велес
Рис. 4. Рапс яровой сорта Велес, фаза начала созревания
Масса 1000 семян за годы испытаний колебалась от 3,8 до 4,2 г, высота растений 100–120 см, прикрепление нижнего стручка отмечалось на высоте 35–50 см. Использование сорта гарантирует получение 28–32 т/га зеленой массы с выходом до 6 т/га сухого вещества.
Заключение. С 2021 г. сорт Велес решением экспертной комиссии ФГБУ «Госсорткомиссия» допущен к использованию по Северо-Западному (2), Центральному (3), Уральскому (9) и Западно-Сибирскому (10) регионам.
